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LE
SEXAGE DES OISEAUX PAR ADN |
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POURQUOI
SEXER LES OISEAUX ? |
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Le sexage est l'étape
incontournable pour optimiser l'élevage des oiseaux
en captivité.
Pour certaines espèces d'oiseaux, la différence
entre le mâle et la femelle est visible extérieurement
(particularité physique, couleur…) : on parle
alors de dimorphisme sexuel. Le sexage peut donc être
réalisé après une simple observation
de l'oiseau par une personne avertie.
Pour beaucoup d'autres espèces en revanche, le
dimorphisme sexuel est inapparent ou n'apparaît
que tardivement, ce qui reporte d'autant la cession des
oisillons ou la formation de couples. Les éleveurs
ont donc aujourd'hui recours au sexage ADN, une méthode
révolutionnaire qui fait appel aux derniers progrès
scientifiques en matière de génétique,.pour
déterminer de manière précoce le
sexe de leurs oiseaux. |
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LE
SEXAGE ADN |
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Qu'est
ce que l'ADN ? |
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L'ADN est une molécule
présente dans les cellules de tous les êtres
vivants. Elle est constituée d'une succession de
gènes qui portent l'information génétique
propre à chaque individu. Organisé en chromosomes
chez les oiseaux, l'ADN est en quelque sorte "le
code-barre " de chaque individu. |
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Biologie
du gène et PCR |
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Depuis une vingtaine
d'année, les scientifiques travaillent sur des
méthodes qui permettent une étude très
fine des gènes. En effet, l'ADN est présent
en très petite quantité dans les cellules
et il n'est pas possible d'étudier ou de rechercher
des gènes sur des quantités si petites d'ADN.
Il y a environ 15 ans, une méthode a révolutionné
le domaine de la génétique. Cette méthode
c'est la PCR (Polymerase Chain Reaction ou amplification
en chaîne par la polymérase). Cette technique
permet, à la manière d'une photocopieuse,
de dupliquer un très grand nombre de fois un gène
précis, présent sur l'ADN d'un être
vivant. Avec cette méthode, en partant de quelques
cellules renfermant chacune 1 gène particulier
impossible à mettre en évidence par ailleurs,
il est possible d'obtenir en quelques heures plusieurs
milliards de milliards de copies de ce gène qui
sont ensuite visualisées par des techniques appropriées.
La présence d'ADN amplifié au stade final
de l'analyse permet donc d'en déduire qu'une copie
au moins du gène était présente dans
le prélèvement soumis à l'analyse.
L'animal à l'origine du prélèvement
est donc déclaré positif vis-à-vis
du gène recherché.
Cette méthode est utilisée dans de nombreux
laboratoire aujourd'hui pour le diagnostic de certaines
maladies génétiques, pour la recherche de
bactéries ou de virus et pour la réalisation
d'empreintes génétiques. |
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ADN
et sexage |
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Un certain nombre d'oiseaux
ne présentent pas ou peu de dimorphisme sexuel
évident (différence visible entre le mâle
et la femelle). Cependant, l'information génétique
codant pour le déterminisme sexuel (aptitude à
devenir un mâle ou une femelle) est présente
dans l'ADN de ces oiseaux bien avant l 'éclosion.
Le principe du sexage par ADN est la recherche les gènes
spécifiques du caractère mâle ou femelle
dans l'ADN des oiseaux et principalement sur les chromosomes
sexuels (appelés gonosomes) : chez les oiseaux,
la femelle est dite hétérogamétique,
car elle possède deux chromosomes sexuels de taille
différente appelés Z et W et le mâle
est dit homogamétique et possède deux chromosomes
Z. Cette disposition particulière est l'inverse
de celle rencontrée chez les mammifères
(XX pour la femelle et XY pour le mâle ).
Pour mettre en évidence les gènes qui permettent
de différencier le mâle de la femelle, on
utilise la méthode PCR. Cette méthode, rapide
et non stressante et qui semble aujourd'hui se généraliser
auprès des éleveurs, peut être réalisée
sur l'oiseau au nid, bien avant qu'il ait atteint la maturité
sexuelle. |
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A
partir de quel prélèvement peut-on sexer
? |
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Le sexage moléculaire
est fondé sur l'analyse de l'ADN de l'oiseau. Il
est donc nécessaire de disposer d'un échantillon
contenant des cellules de l'oiseau. Sur la base de ce
principe, tout fragment d'organe peut être utilisé
pour l'analyse mais par souci de commodité la plume
reste le prélèvement le plus utilisé.
Certains éleveurs, désireux de sexer leurs
oisillons avant l'apparition des premières plumes,
sont amenés à demander une analyse à
partir d'une goutte de sang : il est dans ce cas important
de rappeler que le prélèvement sanguin est
un acte vétérinaire et qu'il doit être
réalisé dans des conditions d'asepsie rigoureuses. |
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Le
sexage à partir d'une plume |
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Le
prélèvement |
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Le sexage ADN à
partir d'une plume est une alternative au sexage à
partir du sang et a aujourd'hui tendance, du fait de la
facilité du prélèvement, a être
adopté par une très grande majorité
d'éleveurs.
Il suffit de prélever soit 3-4 plumes sur la poitrine
ou à la base du cou de l'oiseau, ou une plume de
l'aile et de la queue et de les placer dans un sachet
prévu à cet effet. Pour éviter la
douleur et un stress excessif chez l'oiseau, il est important
de n'arracher qu'une plume à la fois. EVITER le
sang à la base de la plume !
Les avantages de cette méthode sont :
- Pas de sang pendant et après le prélèvement
- Minimum de douleur et de stress pour l'oiseau
- Les échantillons peuvent être expédiés
au laboratoire par la poste dans une simple enveloppe.
La PCR (méthode utilisée par le laboratoire
pour les sexages) est une méthode très sensible
et la moindre particule d'ADN étranger à
l'oiseau et qui viendrait à contaminer le prélèvement
est susceptible de fausser le résultat. Certaines
mesures extrêmement importantes doivent donc être
respectées pour garantir la véracité
du résultat final :
- éviter de toucher avec les doigts la base de
la plume (partie qui entre dans la peau ou follicule plumeux)
- éviter le contact entre les doigts et l'intérieur
du sac destiné à contenir les prélèvements
- éviter de prélever les plumes avec des
gants poudrés ou talqués ; en effet le talc,
même en très petite quantité, peut
avoir un effet inhibiteur sur la méthode utilisée
au laboratoire
Enfin, il est préférable, pour le transport
des prélèvements, d'utiliser des kits de
prélèvements, qui peuvent être fournis
par les laboratoires pratiquant l'analyse : ils garantissent
la bonne conservation des plumes durant le transport et
permettent une manipulation plus commode des échantillons
au laboratoire. |
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Enregistrement
et traitement des échantillons |
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A leur arrivée
au laboratoire, les prélèvements sont soigneusement
référencés : les coordonnées
de l'éleveur, le numéro de bague de l'oiseau
ainsi que l'espèce à laquelle il appartient
sont enregistrés et permettent l'attribution d'un
numéro unique à chaque échantillon.
Ce numéro suivra le prélèvement tout
au long de l'analyse et permettra d'archiver les prélèvements
pendant 6 mois au laboratoire. |
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L'étape suivante consiste à extraire
l'ADN à partir des cellules de la pulpe des plumes.
Pour cela, l'extrémité de la plume est
trempée dans une solution qui, chauffée
à température élevée, va
participer à la destruction des cellules et des
structures qui renferment l'ADN. L'ADN se retrouve ainsi
libre et après une étape de purification,
va pouvoir être analysé à l'aide
de la méthode PCR pour rechercher la présence
du gène spécifique du mâle ou de
la femelle. Une série de témoins est également
incorporée dans l'analyse de manière à
pouvoir déceler un éventuel dysfonctionnement
de la méthode PCR. Ces témoins sont généralement
de l'ADN d'oiseaux mâles et femelles confirmés
(couple de reproducteurs par exemple). L'amplification
génique (étape de " photocopie des
gènes ") est réalisée dans
un appareil appelé thermocycleur et dure environ
3 heures. A l'issue de cette amplification, l'ADN synthétisé
est visualisé, après coloration, sous
une lumière UV et le résultat est analysé
par un technicien : la présence de deux signaux
indique que les plumes appartiennent à une femelle
et la présence d'une bande unique permet de conclure
à un mâle.
La collecte des résultats au niveau du laboratoire
permet d'établir les certificats de sexage qui
sont alors envoyés à l'éleveur.
L'ADN de chaque individu est ensuite conservé
par le laboratoire, congelé à une température
de -20°C.
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On le voit, la génétique
est aujourd'hui une méthode de choix pour déterminer
le sexe des oiseaux : rapide, fiable et peu contraignante
pour l 'éleveur, elle est à ce jour la méthode
la moins stressante pour l'oiseau.
L'essor du diagnostic génétique dans les
dernières années a également permis
de développer des tests ADN visant la recherche
d'agents pathogènes tels que les Chlamydies, les
Salmonelles ou le virus de la PBFD. |
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